Real-time PCR là kỹ thuật giúp khuếch đại và phát hiện các vật liệu di truyền (nucelic acid) của mục tiêu như virus, vi khuẩn hay các đột biến gen có tồn tại trong mẫu được xét nghiệm hay không. Phương pháp Real-time sử dụng tín hiệu huỳnh quang tăng cường để cảm biến hấp thụ quang có thể nhận diện và phát hiện được các mục tiêu. Phương pháp xét nghiệm này rất phổ biến ngày nay trong xét nghiệm và nghiên cứu sinh học. Phương pháp này được xây dựng thành nhiều ứng dụng khác nhau để phục vụ các nghiên cứu cơ bản trong khoa học sự sống, công nghệ sinh học, y được, pháp y, xét nghiệm và nhiều lĩnh vực khác.

  Phương pháp Realtime-PCR được chia thành hai dạng phân tích là phân tích định tính (qualitative) và phân tích định lượng (quantitative), việc lựa chọn phương pháp nào được sử  dụng phụ thuộc vào mục đích và hiểu biết của người thực hiện để xây dựng.

  Trong các bệnh viện, phương pháp xét nghiệm bằng Real-time PCR sẽ được thực hiện tại phòng Xét Nghiệm Sinh Học Phân Tử. Ở đó các mẫu bệnh phẩm từ máu ngoại vi, mẫu phết, mẫu đờm, mẫu nước tiểu, mẫu dịch ối, các loại dịch chọc hút hay các loại mẫu khác sẽ được được thực hiện tách chiết DNA/RNA, tinh sạch mẫu sau tách chiết (nếu cần), thực hiện xét nghiệm và trả kết quả. Các quy trình trong phòng xét nghiệm/chẩn đoán sinh học phân tử sẽ được thực hiện tự động hoặc thủ công tuỳ vào máy móc và thiết bị của phòng đang được trang bị.